產品描(miao)述

Mich TLX DNA-seg kit (illumina Compatible) 是為(wei) illumina 平臺(tai)設計(ji)的 DNA 文(wen)庫準備試(shi)劑(ji)盒,適(shi)用於(yu)起(qi)始(shi)量(liang) 1 ng-200 ng 的 DNA 樣本(ben)，試(shi)劑(ji)盒經過(guo)精(jing)心(xin)設計(ji)和(he)優(you)化，能(neng)夠(gou)快速(su)構(gou)建(jian)文(wen)庫(2.5-3.5小(xiao)時)，有(you)高(gao)效(xiao)的文(wen)庫轉化率(lv)與擴(kuo)增(zeng)效率，已經經過(guo)多(duo)樣本(ben)驗證(zheng)可(ke)獲得優(you)異的文(wen)庫與測(ce)序數據，可(ke)用於(yu)石蠟(la)包埋組(zu)織 DNA 樣本(ben)建(jian)庫。試(shi)劑(ji)盒包含了 DNA 片段化和(he)末(mo)端(duan)修復加 A尾的預混(hun)液(ye)、連接預(yu)混(hun)液(ye)、高(gao)保(bao)真擴(kuo)增(zeng)預混(hun)液(ye)、短接(jie)頭(tou)和(he)含有 INDEX 的 PCR 引物(wu)(可(ke)以(yi)根據(ju)客(ke)戶(hu)要(yao)求(qiu)進行(xing)選配(pei))。

(註(zhu)意(yi): 本(ben)試(shi)劑(ji)盒不(bu)可(ke)直(zhi)接(jie)用不(bu)帶 INDEX 的引物(wu)進(jin)行 PCR 反應(ying))。

產品信(xin)息

產品組(zu)分

使(shi)用流(liu)程(cheng)

註(zhu)意(yi)事(shi)項

壹(yi)、關於(yu)操(cao)作

1. 請(qing)穿(chuan)實(shi)驗服並(bing)戴壹(yi)次性手(shou)套(tao)進(jin)行(xing)實驗。

2. 使(shi)用前(qian)請(qing)將(jiang)試(shi)劑(ji)盒各(ge)組(zu)分置於(yu)室(shi)溫(wen)解(jie)凍(dong)。解(jie)凍後充(chong)分混(hun)勻，短(duan)暫(zan)離(li)心後(hou)置於(yu)冰(bing)上待(dai)用。

3. 混(hun)勻時(shi)請(qing)輕輕吹打(da)或(huo)輕輕振蕩，劇烈振蕩(dang)可(ke)能(neng)會造(zao)成(cheng)文(wen)庫產出下降。

4. 為(wei)避免樣品(pin)交叉(cha)汙染(ran)，推(tui)薦使(shi)用帶(dai)濾(lv)芯的壹(yi)次性槍(qiang)頭(tou)。

5. 推(tui)薦在(zai)帶(dai)熱蓋的 PCR 儀(yi)中(zhong)進行(xing)各步(bu)驟(zhou)反應(ying)，使用前(qian)應(ying)預熱 PCR 儀(yi)至(zhi)反應(ying)溫(wen)度附(fu)近請(qing)在(zai)潔(jie)凈(jing)的實驗環境(jing)下實驗，避免汙(wu)染(ran)。

二(er)、TLX Adapter for ILM說(shuo)明(ming)

1. TLX Adapter for ILM 采(cai)用短(duan)接(jie)頭(tou)模式(shi)。

2. 接(jie)頭(tou)濃度: 15 uM；直接(jie)用於(yu)相(xiang)應(ying)建(jian)庫試(shi)劑(ji)盒連接體系(xi)裏即(ji)可(ke)。

3. -20°C保(bao)存(cun)，使用前(qian)提前(qian)融化，盡(jin)量(liang)低溫(wen)融化，避(bi)免在(zai)超(chao)過 30°的環境(jing)中(zhong)融化。

4. 建(jian)庫推薦使(shi)用量(liang): 常規 DNA投(tou)入量(liang) 100-200 ng,2uL/rxns; 其他(ta) DNA 投(tou)入量(liang)需要(yao)適(shi)當(dang)調(tiao)整接頭(tou)使用量(liang)。

三(san)、關於(yu)磁珠(zhu)純化與分(fen)選(xuan)

1. DNA 片(pian)段選(xuan)擇步(bu)驟(zhou)可(ke)在(zai)接(jie)頭(tou)連接後(hou)或(huo)文(wen)庫擴(kuo)增(zeng)後進行。

2. 當(dang)Input DNA質量(liang)> 50 ng，建(jian)議(yi)在(zai)接頭(tou)連接後(hou)分(fen)選；如(ru)Input DNA 質量(liang)<50 ng，可(ke)在(zai)文(wen)庫擴(kuo)增(zeng)後進行分(fen)選(xuan)。

3. TLX Ligase Buffer 包含高(gao)濃度的 PEG，對(dui)雙(shuang)輪磁珠(zhu)分選產生顯著(zhu)影(ying)響(xiang)。因(yin)此(ci)，當(dang)在(zai)接(jie)頭(tou)連接後(hou)進(jin)行片段選(xuan)擇，須先(xian)進(jin)行純(chun)化步(bu)驟(zhou)，再進(jin)行雙(shuang)輪分選(xuan)步(bu)驟(zhou)，如(ru)在(zai)文(wen)庫擴(kuo)增(zeng)後進行片(pian)段選(xuan)擇，可(ke)直(zhi)接(jie)進(jin)行(xing)雙(shuang)輪磁珠(zhu)分選步(bu)驟(zhou)。

4. 磁珠(zhu)使用前(qian)應(ying)先平(ping)衡(heng)至(zhi)室(shi)溫(wen)，並(bing)混(hun)勻再(zai)使(shi)用，否(fou)則會導(dao)致(zhi)得率(lv)下降。

5. 80%乙醇應(ying)現(xian)用現(xian)配，否(fou)則將影(ying)響(xiang)回(hui)收(shou)效率。

6. 6進(jin)行(xing)片(pian)段選(xuan)擇時，初(chu)始(shi)樣品(pin)體積(ji)應(ying)盡(jin)量(liang)> 100 uL，初始(shi)樣本(ben)體積(ji)越大(da)，片段選(xuan)擇效果(guo)越好(hao)。

四(si)、關於(yu)文(wen)庫擴(kuo)增(zeng)

五(wu)、關於(yu)文(wen)庫質檢(jian)

1. 通常情況下，構(gou)建(jian)好(hao)的文(wen)庫可(ke)通過長(chang)度分布(bu)檢(jian)測(ce)和(he)濃度檢(jian)測(ce)來(lai)進行(xing)質量(liang)評(ping)價。

2. 文(wen)庫濃度檢(jian)測(ce)可(ke)使(shi)用：基(ji)於(yu)雙(shuang)鏈(lian) DNA熒光染料的方法，如(ru)Qubit或(huo) gPCR 絕對(dui)定量(liang)的方法。

3. 文(wen)庫長(chang)度分布(bu)檢(jian)測(ce)，可(ke)通過 Agilent Bioanalvzer 2100 等基(ji)於(yu)毛(mao)細管電泳或微(wei)控(kong)流(liu)原(yuan)理(li)的設備進行(xing)檢(jian)測(ce)。