產(chan)品(pin)描述

Mich TLX DNA-seg kit (illumina Compatible) 是為 illumina 平(ping)臺(tai)設(she)計(ji)的(de) DNA 文庫(ku)準(zhun)備(bei)試劑(ji)盒(he),適(shi)用於起始量(liang) 1 ng-200 ng 的(de) DNA 樣本(ben)，試(shi)劑(ji)盒(he)經(jing)過精心(xin)設(she)計(ji)和優(you)化(hua)，能(neng)夠(gou)快(kuai)速(su)構(gou)建文庫(ku)(2.5-3.5小(xiao)時(shi))，有高效的文庫(ku)轉(zhuan)化(hua)率(lv)與(yu)擴(kuo)增效率(lv)，已經經過多樣本(ben)驗(yan)證(zheng)可(ke)獲得(de)優(you)異的(de)文庫(ku)與(yu)測序數(shu)據(ju)，可(ke)用於(yu)石(shi)蠟包埋組(zu)織 DNA 樣本(ben)建(jian)庫(ku)。試(shi)劑(ji)盒包含(han)了(le) DNA 片(pian)段化(hua)和末(mo)端修復加(jia) A尾(wei)的(de)預混(hun)液、連接(jie)預混(hun)液、高保真(zhen)擴(kuo)增預混(hun)液、短(duan)接頭(tou)和含(han)有 INDEX 的 PCR 引物(wu)(可(ke)以根據(ju)客(ke)戶(hu)要(yao)求(qiu)進(jin)行(xing)選配(pei))。

(註意: 本(ben)試(shi)劑(ji)盒(he)不可(ke)直接(jie)用(yong)不帶(dai) INDEX 的引物(wu)進(jin)行(xing) PCR 反應(ying))。

產(chan)品(pin)信(xin)息

產(chan)品(pin)組分(fen)

使用流程(cheng)

註意事項(xiang)

壹(yi)、關(guan)於操作

1. 請穿(chuan)實驗(yan)服(fu)並戴壹(yi)次(ci)性手套(tao)進(jin)行(xing)實驗(yan)。

2. 使用前請將試(shi)劑(ji)盒各組(zu)分(fen)置(zhi)於(yu)室(shi)溫(wen)解凍(dong)。解凍(dong)後(hou)充分(fen)混(hun)勻，短(duan)暫(zan)離(li)心(xin)後(hou)置(zhi)於(yu)冰(bing)上待用。

3. 混勻時請輕(qing)輕(qing)吹打或(huo)輕(qing)輕(qing)振蕩，劇烈振蕩可(ke)能(neng)會造成文庫(ku)產(chan)出下(xia)降。

4. 為避(bi)免(mian)樣品(pin)交叉(cha)汙染(ran)，推薦(jian)使用帶(dai)濾(lv)芯(xin)的(de)壹(yi)次(ci)性槍(qiang)頭(tou)。

5. 推薦(jian)在(zai)帶(dai)熱蓋(gai)的(de) PCR 儀中(zhong)進(jin)行(xing)各步驟反應(ying)，使用前應(ying)預熱(re) PCR 儀至(zhi)反(fan)應(ying)溫(wen)度(du)附(fu)近請在(zai)潔凈的(de)實驗(yan)環(huan)境(jing)下實驗(yan)，避(bi)免(mian)汙染(ran)。

二(er)、TLX Adapter for ILM說明(ming)

1. TLX Adapter for ILM 采(cai)用(yong)短(duan)接頭(tou)模式。

2. 接頭(tou)濃(nong)度: 15 uM；直(zhi)接(jie)用(yong)於(yu)相(xiang)應(ying)建(jian)庫(ku)試(shi)劑盒連接(jie)體(ti)系(xi)裏即(ji)可(ke)。

3. -20°C保存(cun)，使用前提前(qian)融(rong)化(hua)，盡(jin)量(liang)低(di)溫融(rong)化(hua)，避(bi)免(mian)在(zai)超(chao)過 30°的環(huan)境(jing)中融(rong)化(hua)。

4. 建庫推薦(jian)使用量(liang): 常規 DNA投入(ru)量(liang) 100-200 ng,2uL/rxns; 其(qi)他(ta) DNA 投(tou)入(ru)量(liang)需要(yao)適(shi)當調(tiao)整(zheng)接(jie)頭(tou)使用量(liang)。

三、關於磁珠純(chun)化(hua)與(yu)分(fen)選(xuan)

1. DNA 片(pian)段選(xuan)擇(ze)步驟可(ke)在(zai)接(jie)頭(tou)連接(jie)後(hou)或(huo)文庫(ku)擴(kuo)增後(hou)進(jin)行(xing)。

2. 當Input DNA質量(liang)> 50 ng，建(jian)議(yi)在(zai)接(jie)頭(tou)連接(jie)後(hou)分(fen)選(xuan)；如(ru)Input DNA 質量(liang)<50 ng，可(ke)在(zai)文庫(ku)擴(kuo)增後(hou)進(jin)行(xing)分(fen)選(xuan)。

3. TLX Ligase Buffer 包含(han)高(gao)濃(nong)度的(de) PEG，對(dui)雙輪磁珠分(fen)選(xuan)產(chan)生顯著(zhu)影響(xiang)。因(yin)此(ci)，當(dang)在(zai)接(jie)頭(tou)連接(jie)後(hou)進(jin)行(xing)片(pian)段選(xuan)擇(ze)，須(xu)先進(jin)行(xing)純(chun)化(hua)步驟，再進(jin)行(xing)雙輪分(fen)選(xuan)步驟，如(ru)在(zai)文庫(ku)擴(kuo)增後(hou)進(jin)行(xing)片(pian)段選(xuan)擇(ze)，可(ke)直接(jie)進(jin)行(xing)雙輪磁珠分(fen)選(xuan)步驟。

4. 磁珠使用前應(ying)先(xian)平(ping)衡至(zhi)室溫(wen)，並混勻再使用，否(fou)則(ze)會導(dao)致得(de)率(lv)下(xia)降(jiang)。

5. 80%乙醇應(ying)現(xian)用(yong)現(xian)配(pei)，否(fou)則(ze)將影響(xiang)回(hui)收(shou)效率(lv)。

6. 6進(jin)行(xing)片(pian)段選(xuan)擇(ze)時(shi)，初始樣品(pin)體積(ji)應(ying)盡(jin)量(liang)> 100 uL，初(chu)始樣本(ben)體(ti)積(ji)越大，片(pian)段選(xuan)擇(ze)效果(guo)越好。

四、關於文庫(ku)擴(kuo)增

五、關於文庫(ku)質檢(jian)

1. 通常情(qing)況(kuang)下(xia)，構(gou)建好(hao)的(de)文庫(ku)可(ke)通過長度(du)分(fen)布(bu)檢(jian)測(ce)和濃(nong)度檢(jian)測(ce)來進(jin)行(xing)質量(liang)評價。

2. 文庫(ku)濃(nong)度檢(jian)測(ce)可(ke)使用：基(ji)於(yu)雙(shuang)鏈(lian) DNA熒(ying)光染(ran)料的(de)方法，如(ru)Qubit或(huo) gPCR 絕(jue)對(dui)定量(liang)的(de)方法。

3. 文庫(ku)長度(du)分(fen)布(bu)檢(jian)測(ce)，可(ke)通過 Agilent Bioanalvzer 2100 等(deng)基(ji)於(yu)毛細(xi)管電(dian)泳或(huo)微控流原(yuan)理(li)的設(she)備(bei)進(jin)行(xing)檢(jian)測(ce)。