蛋(dan)白(bai)濃度測定(ding)的(de)方(fang)法(fa)

　　蛋(dan)白(bai)濃度測定(ding)的(de)方(fang)法(fa)：
 

　　1. 紫(zi)外分(fen)光(guang)光(guang)度法(fa)
 

　　紫(zi)外光(guang)譜(pu)吸(xi)收(shou)法(fa)測定(ding)蛋(dan)白(bai)質含(han)量是(shi)講蛋(dan)白(bai)質溶(rong)液(ye)直(zhi)接(jie)在(zai)紫(zi)外分(fen)光(guang)光(guang)度計(ji)中(zhong)測定(ding)的(de)方(fang)法(fa)，不需(xu)要(yao)任(ren)何試劑，操作簡單且(qie)易(yi)回(hui)收(shou)。蛋(dan)白(bai)質溶(rong)液(ye)在(zai)280nm附(fu)近(jin)有(you)強(qiang)烈的(de)吸(xi)收(shou)，這是由(you)於(yu)蛋(dan)白(bai)質中(zhong)酪(lao)氨酸(suan)、色(se)氨酸(suan)殘基(ji)而引(yin)起的，所(suo)以光(guang)密(mi)度(du)受這兩種氨基(ji)酸(suan)含(han)量的(de)支配(pei)。另外核(he)蛋(dan)白(bai)或提(ti)取過(guo)程中(zhong)雜(za)有(you)的(de)核(he)酸(suan)對(dui)測定(ding)結(jie)果引(yin)起(qi)極大(da)誤(wu)差(cha)，其最(zui)大(da)吸(xi)收(shou)在(zai)260nm。所(suo)以同(tong)時(shi)測定(ding)280及(ji)260nm兩(liang)種(zhong)波長的吸(xi)光(guang)度，通(tong)過(guo)計(ji)算可(ke)得較為(wei)正(zheng)確的(de)蛋(dan)白(bai)質含(han)量。
 

　　2. 雙(shuang)縮(suo)脲(niao)法(fa)
 

　　利用半飽和硫酸(suan)銨(an)或27.8%硫酸(suan)鈉(na)——亞硫酸(suan)鈉(na)可(ke)使血清(qing)球(qiu)蛋(dan)白(bai)沈澱下(xia)來，而(er)此(ci)時(shi)血清(qing)白(bai)蛋(dan)白(bai)仍(reng)處於(yu)溶(rong)解狀(zhuang)態，因(yin)此(ci)可(ke)把(ba)兩者(zhe)分(fen)開(kai)，這種利用不同(tong)濃(nong)度的中(zhong)性鹽分(fen)離蛋(dan)白(bai)的方(fang)法(fa)稱(cheng)為鹽方(fang)法(fa)。鹽析(xi)分(fen)離蛋(dan)白(bai)質的方(fang)法(fa)不僅(jin)用於(yu)臨床(chuang)醫(yi)學(xue)，而且(qie)還(hai)廣泛(fan)地用於(yu)生物化學(xue)研究工作中(zhong)，如壹(yi)些特殊蛋(dan)白(bai)質—酶、蛋(dan)白(bai)激(ji)素等的(de)分(fen)離和(he)純化(hua)。
 

　　蛋(dan)白(bai)質和雙(shuang)縮脲(niao)壹(yi)樣(yang)，在(zai)堿(jian)性溶(rong)液(ye)中(zhong)能(neng)與(yu)銅(tong)離(li)子(zi)形(xing)成(cheng)紫(zi)色(se)絡合(he)物(雙(shuang)縮脲(niao)反(fan)應)，且(qie)其呈色(se)深淺(qian)與蛋(dan)白(bai)質的含(han)量成(cheng)正(zheng)比，因(yin)此(ci)可(ke)於(yu)蛋(dan)白(bai)質的定(ding)量測定(ding)。
 

　　但必須註意(yi)，此(ci)反(fan)應並非(fei)蛋(dan)白(bai)質所(suo)*，凡分(fen)子(zi)內有(you)兩(liang)個(ge)或兩(liang)個(ge)以上(shang)的肽鍵的化合(he)物(wu)以及分(fen)子(zi)內有(you)—CH2—NH2等結(jie)構化合物，雙(shuang)縮(suo)脲(niao)反(fan)應也呈(cheng)陽(yang)性。本實(shi)驗用27.8%硫酸(suan)鈉(na)—亞硫酸(suan)鈉(na)溶(rong)液(ye)稀釋(shi)血清(qing)，取(qu)出(chu)壹(yi)部(bu)分(fen)用雙縮脲(niao)反(fan)應測定(ding)蛋(dan)白(bai)質的含(han)量，剩余部(bu)分(fen)則用濾紙過(guo)濾(lv)，使(shi)析出(chu)的球蛋(dan)白(bai)與白蛋(dan)白(bai)分(fen)離，取(qu)出(chu)濾液(ye)用同壹(yi)反(fan)應測定(ding)白(bai)蛋(dan)白(bai)的含(han)量。總(zong)蛋(dan)白(bai)與白蛋(dan)白(bai)含(han)量之(zhi)差(cha)即球(qiu)蛋(dan)白(bai)的含(han)量。白(bai)蛋(dan)白(bai)與球蛋(dan)白(bai)之比即(ji)所(suo)謂的(de)白/球比值(zhi)。
 

　　3. Folin-酚(fen)試劑法(fa)
 

　　目前實(shi)驗室較多(duo)用Folin-酚(fen)法(fa)測定(ding)蛋(dan)白(bai)質含(han)量，此(ci)法(fa)的特點是(shi)靈(ling)敏度高，較雙(shuang)縮(suo)脲(niao)高兩個(ge)數量級(ji)，較紫(zi)外法(fa)略(lve)高，操作稍微麻(ma)煩，反(fan)應約(yue)在(zai)15分(fen)鐘有(you)最(zui)大(da)顯色(se)，並最(zui)少可(ke)穩定(ding)幾(ji)個(ge)小時(shi)，其不足(zu)之(zhi)處是(shi)幹(gan)擾(rao)因(yin)素較多(duo)，有(you)較多(duo)種(zhong)類的物(wu)質都(dou)會(hui)影響(xiang)測定(ding)結(jie)果的(de)準(zhun)確性。其原(yuan)理是(shi)蛋(dan)白(bai)質中(zhong)含(han)有(you)酚(fen)基(ji)的酪(lao)氨酸(suan)，可(ke)與酚(fen)試劑中(zhong)的(de)磷(lin)鉬(mu)鎢酸(suan)作(zuo)用產(chan)生蘭色(se)化(hua)合(he)物，顏(yan)色(se)深(shen)淺(qian)與(yu)蛋(dan)白(bai)含(han)量成(cheng)正(zheng)比。
 

　　4. 考(kao)馬氏亮藍G-250
 

　　此(ci)方(fang)法(fa)是1976年(nian)Bradform建立(li)。染料(liao)結(jie)合法(fa)測定(ding)蛋(dan)白(bai)質的優(you)點(dian)是靈(ling)敏度較高，可(ke)檢測到微量蛋(dan)白(bai)，操作簡(jian)便(bian)、快迅(xun)，試劑配(pei)制極簡單，重(zhong)復(fu)性好，但幹(gan)擾(rao)因(yin)素多(duo)。考(kao)馬氏亮藍G-250具(ju)有(you)紅(hong)色(se)和(he)青(qing)色兩(liang)種(zhong)色(se)調、在(zai)酸(suan)性溶(rong)液(ye)中(zhong)遊(you)離狀(zhuang)度(du)下(xia)為棕(zong)紅色(se)，當(dang)它通(tong)過(guo)疏水作(zuo)用與蛋(dan)白(bai)質結(jie)合後(hou)，變(bian)成藍色，最(zui)大(da)吸(xi)收(shou)波長從465nm轉(zhuan)移到595nm處，在(zai)壹(yi)定(ding)的(de)範(fan)圍(wei)內，蛋(dan)白(bai)質含(han)量與(yu) 595nm的(de)吸(xi)光(guang)度成(cheng)正(zheng)比，測定(ding)595nm處光(guang)密(mi)度(du)值的增加(jia)即(ji)可(ke)進行(xing)蛋(dan)白(bai)質的定(ding)量。
 

　　以(yi)上(shang)便是(shi)實驗室中(zhong)常(chang)見的(de)幾(ji)種(zhong)蛋(dan)白(bai)濃度測定(ding)的(de)方(fang)法(fa)，另外還(hai)有(you)凱(kai)氏(shi)定(ding)氮(dan)法(fa)和BCA法(fa)，有(you)凱(kai)氏(shi)定(ding)氮(dan)法(fa)結(jie)果精(jing)確(que)，但操(cao)作(zuo)復(fu)雜(za)，BCA法(fa)又以(yi)其試劑穩定(ding)，抗(kang)幹擾(rao)能(neng)力(li)較強(qiang)，結(jie)果穩(wen)定(ding)，靈(ling)敏度高而受到歡迎。