產品描述

Mich TLX DNA-seg kit (illumina Compatible) 是為 illumina 平臺(tai)設計(ji)的 DNA 文庫準備(bei)試劑盒,適用(yong)於起始(shi)量(liang) 1 ng-200 ng 的 DNA 樣本(ben)，試劑盒經(jing)過(guo)精(jing)心設計(ji)和優化，能(neng)夠(gou)快速構建文(wen)庫(2.5-3.5小(xiao)時)，有(you)高(gao)效(xiao)的(de)文庫轉(zhuan)化(hua)率(lv)與(yu)擴增(zeng)效(xiao)率(lv)，已(yi)經(jing)經(jing)過(guo)多樣本(ben)驗證可獲(huo)得(de)優(you)異的文庫與(yu)測序數據，可用(yong)於石蠟包(bao)埋組織 DNA 樣本(ben)建(jian)庫。試劑盒包(bao)含(han)了(le) DNA 片(pian)段(duan)化(hua)和末(mo)端修復加(jia) A尾的(de)預(yu)混液(ye)、連(lian)接預(yu)混液(ye)、高(gao)保(bao)真(zhen)擴增(zeng)預混液(ye)、短(duan)接頭和含(han)有(you) INDEX 的(de) PCR 引(yin)物(可以(yi)根據客戶要(yao)求(qiu)進行選(xuan)配)。

(註意: 本(ben)試劑盒不(bu)可直接用(yong)不(bu)帶 INDEX 的引(yin)物進行 PCR 反應)。

產品信息

產品(pin)組分(fen)

使(shi)用(yong)流程

註意事項

壹、關於操(cao)作

1. 請穿實(shi)驗服並(bing)戴壹次(ci)性(xing)手(shou)套進(jin)行實驗。

2. 使(shi)用(yong)前請將試劑盒各(ge)組分(fen)置於(yu)室(shi)溫解凍(dong)。解凍(dong)後充分(fen)混勻，短(duan)暫(zan)離心後置於(yu)冰(bing)上(shang)待(dai)用(yong)。

3. 混勻時請(qing)輕輕吹打或(huo)輕輕振(zhen)蕩，劇(ju)烈(lie)振(zhen)蕩可能(neng)會(hui)造成文庫產出(chu)下降(jiang)。

4. 為避免樣品(pin)交(jiao)叉(cha)汙(wu)染(ran)，推薦(jian)使(shi)用(yong)帶濾(lv)芯的(de)壹次(ci)性(xing)槍(qiang)頭。

5. 推薦(jian)在(zai)帶熱蓋的(de) PCR 儀中(zhong)進行各步驟反應，使(shi)用(yong)前應預熱(re) PCR 儀至(zhi)反應溫度附近(jin)請(qing)在潔(jie)凈的(de)實(shi)驗環(huan)境下實(shi)驗，避免汙(wu)染(ran)。

二(er)、TLX Adapter for ILM說明(ming)

1. TLX Adapter for ILM 采用(yong)短(duan)接頭模式(shi)。

2. 接頭濃度: 15 uM；直接用(yong)於相應(ying)建(jian)庫試劑盒連(lian)接體(ti)系裏(li)即(ji)可。

3. -20°C保存，使(shi)用(yong)前提前融(rong)化，盡(jin)量低(di)溫融(rong)化，避免在(zai)超過(guo) 30°的環(huan)境中(zhong)融化(hua)。

4. 建庫推薦(jian)使(shi)用(yong)量: 常規 DNA投(tou)入量(liang) 100-200 ng,2uL/rxns; 其(qi)他(ta) DNA 投(tou)入量(liang)需(xu)要(yao)適當調整接頭使(shi)用(yong)量。

三、關於磁(ci)珠純化與(yu)分選(xuan)

1. DNA 片段選(xuan)擇步(bu)驟(zhou)可在(zai)接頭連(lian)接後或(huo)文(wen)庫擴增(zeng)後進行。

2. 當Input DNA質量> 50 ng，建(jian)議(yi)在(zai)接頭連(lian)接後分選(xuan)；如(ru)Input DNA 質(zhi)量(liang)<50 ng，可在(zai)文(wen)庫擴增(zeng)後進行分選(xuan)。

3. TLX Ligase Buffer 包含(han)高(gao)濃(nong)度的 PEG，對(dui)雙(shuang)輪(lun)磁(ci)珠(zhu)分(fen)選(xuan)產生(sheng)顯著(zhu)影(ying)響。因(yin)此(ci)，當(dang)在(zai)接頭連(lian)接後進行片段選(xuan)擇，須(xu)先進行純化步驟，再(zai)進行雙(shuang)輪(lun)分(fen)選(xuan)步驟(zhou)，如(ru)在(zai)文(wen)庫擴增(zeng)後進行片段選(xuan)擇，可直接進(jin)行雙(shuang)輪(lun)磁(ci)珠(zhu)分(fen)選(xuan)步驟(zhou)。

4. 磁珠使(shi)用(yong)前應先平衡至(zhi)室溫，並(bing)混勻再(zai)使(shi)用(yong)，否則會(hui)導致(zhi)得(de)率(lv)下降(jiang)。

5. 80%乙醇應(ying)現用(yong)現配，否則(ze)將影(ying)響回收效(xiao)率(lv)。

6. 6進行片段選(xuan)擇時，初(chu)始(shi)樣品(pin)體(ti)積(ji)應盡(jin)量(liang)> 100 uL，初始(shi)樣本(ben)體(ti)積(ji)越(yue)大(da)，片段選(xuan)擇效(xiao)果越(yue)好(hao)。

四、關於文(wen)庫擴增(zeng)

五(wu)、關於文(wen)庫質檢(jian)

1. 通常情(qing)況(kuang)下，構(gou)建好的(de)文庫可通(tong)過(guo)長度分布(bu)檢(jian)測和濃(nong)度檢測(ce)來(lai)進行質量評(ping)價。

2. 文庫濃度檢測(ce)可使(shi)用(yong)：基於(yu)雙(shuang)鏈 DNA熒(ying)光(guang)染(ran)料的(de)方法，如(ru)Qubit或(huo) gPCR 絕(jue)對(dui)定(ding)量(liang)的(de)方法。

3. 文庫長度分布(bu)檢(jian)測，可通(tong)過(guo) Agilent Bioanalvzer 2100 等(deng)基於(yu)毛(mao)細管(guan)電(dian)泳或(huo)微控(kong)流原理的(de)設備(bei)進行檢測。