核酸定量檢測試(shi)劑的(de)線(xian)性(xing)範圍(wei)廣(guang)和(he)可靠(kao)性(xing)高是其核心(xin)性能(neng)指標,直(zhi)接影(ying)響(xiang)實(shi)驗(yan)結(jie)果(guo)的(de)準(zhun)確(que)性(xing)和(he)適(shi)用性(xing)。以下是對這(zhe)兩(liang)大特點的(de)詳(xiang)細解讀(du):
壹、核酸(suan)定量檢測試(shi)劑線(xian)性(xing)範(fan)圍廣(guang):
1. 定義(yi)與意(yi)義(yi)
線(xian)性(xing)範(fan)圍(wei):指(zhi)試劑在(zai)檢(jian)測核(he)酸(suan)濃(nong)度時(shi),信(xin)號值(zhi)(如(ru)熒光強度(du)、吸光(guang)度(du)等(deng))與核(he)酸(suan)濃(nong)度呈線性(xing)關(guan)系(xi)的(de)區間(jian)。
廣(guang)線性(xing)範圍(wei)的優勢(shi):
可檢(jian)測從低濃(nong)度到(dao)高濃(nong)度的(de)核酸(suan)樣(yang)本(ben),適(shi)應(ying)不同(tong)實(shi)驗(yan)需(xu)求(qiu)(如(ru)微量DNA提取、高(gao)通(tong)量測序(xu)文(wen)庫定(ding)量)。
減(jian)少(shao)樣(yang)本(ben)稀釋次數,降(jiang)低操(cao)作誤(wu)差(cha)和(he)交(jiao)叉(cha)汙(wu)染(ran)風(feng)險(xian)。
適(shi)用於(yu)復雜樣(yang)本(ben)(如(ru)血液、組(zu)織(zhi)裂(lie)解(jie)液)中核(he)酸濃(nong)度的(de)直(zhi)接檢測。
2. 技術實現(xian)
熒(ying)光染(ran)料優(you)化(hua):
使用高靈敏(min)度(du)熒光染(ran)料,可檢(jian)測低至0.1 pg/μL的(de)DNA或RNA。
通(tong)過(guo)淬滅(mie)機(ji)制減(jian)少(shao)背(bei)景(jing)噪聲,提高信(xin)噪比。
動(dong)態範(fan)圍(wei)擴(kuo)展(zhan):
多(duo)通(tong)道檢(jian)測:通(tong)過(guo)分(fen)光光(guang)度(du)計或熒(ying)光儀的(de)多(duo)波(bo)長(chang)檢測,覆(fu)蓋(gai)更寬(kuan)濃(nong)度範(fan)圍。
標(biao)準(zhun)曲線(xian)設計:采(cai)用(yong)多(duo)點(dian)校準(zhun),確(que)保(bao)線性(xing)回歸。
信(xin)號增益技術:如(ru)酶促(cu)放大反應(ying)(如(ru)PCR結(jie)合(he)熒(ying)光(guang)探針)或納(na)米(mi)材(cai)料增強熒(ying)光信(xin)號。
二(er)、核酸定量檢測試(shi)劑可靠(kao)性(xing)高:
1. 定義與意(yi)義(yi)
可靠(kao)性(xing):指試劑在(zai)不同(tong)實(shi)驗(yan)條(tiao)件(jian)下(如(ru)操作者、儀器、時(shi)間(jian)、樣(yang)本(ben)類(lei)型)的(de)檢(jian)測結(jie)果(guo)壹(yi)致(zhi)性(xing)和(he)重(zhong)復性。
高(gao)可靠(kao)性(xing)的表現:
低CV值(zhi):同(tong)壹(yi)樣(yang)本(ben)多(duo)次檢(jian)測的(de)變異系(xi)數通(tong)常(chang)<5%。
抗幹擾(rao)能(neng)力(li)強:對樣(yang)本(ben)中(zhong)的(de)抑(yi)制劑(如(ru)蛋白質(zhi)、鹽(yan)離(li)子(zi)、腐(fu)殖酸(suan))、雜質或(huo)降(jiang)解(jie)產(chan)物(wu)不敏(min)感(gan)。
長期(qi)穩定性(xing):試劑在(zai)保(bao)質期(qi)內性能(neng)壹致,避(bi)免批次間(jian)差(cha)異。
2. 技術保(bao)障
內參或質(zhi)控:
加(jia)入已知(zhi)濃(nong)度的(de)內標(如(ru)熒光標記(ji)的核酸類(lei)似物(wu)),校正實(shi)驗(yan)誤(wu)差(cha)。
提供(gong)質控品(如(ru)高、低濃(nong)度標(biao)準(zhun)品(pin)),驗(yan)證(zheng)試劑有(you)效(xiao)性(xing)。
標準(zhun)化(hua)流程:
樣(yang)本(ben)處(chu)理(li):推薦(jian)統壹裂解(jie)液或純(chun)化(hua)步驟(zhou)(如(ru)柱回收法(fa)),減(jian)少(shao)提取效(xiao)率(lv)差異。
儀器校(xiao)準(zhun):定(ding)期(qi)校準(zhun)熒(ying)光(guang)儀或(huo)分(fen)光光(guang)度(du)計的光(guang)路(lu)、波(bo)長(chang)和(he)靈(ling)敏(min)度(du)。
數據算法:軟(ruan)件自(zi)動(dong)扣(kou)除(chu)背景值(zhi),並(bing)采(cai)用(yong)多(duo)點(dian)擬(ni)合(he)減(jian)少(shao)人為誤差(cha)。
