RNA HS Assay Kit存(cun)放與(yu)使用技(ji)巧(qiao)

　　壹(yi)、RNA HS Assay Kit存(cun)放條件與(yu)註(zhu)意事(shi)項：

　　1.溫度(du)要求(qiu)

　　未(wei)開(kai)封試(shi)劑(ji)盒(he)：存放在(zai)-20℃，避免反(fan)復凍融(rong)。

　　已(yi)開封試(shi)劑(ji)盒(he)：密(mi)封後(hou)可(ke)短(duan)期存放於(yu)4℃，建(jian)議1個月內用完(wan)，避免活性(xing)成(cheng)分(fen)降解(jie)。

　　關(guan)鍵(jian)組(zu)分(fen)：若頻(pin)繁(fan)使用，可(ke)分(fen)裝(zhuang)後(hou)存(cun)於(yu)-20℃，減少(shao)凍融(rong)次數。

　　2.防(fang)潮(chao)與避光

　　試(shi)劑(ji)盒(he)應遠離(li)潮(chao)濕環境，避免吸(xi)濕導(dao)致(zhi)粉(fen)末結塊(kuai)或(huo)酶(mei)失活。

　　避光保(bao)存(cun)熒(ying)光染(ran)料、底物(wu)等(deng)光敏(min)成(cheng)分(fen)，可(ke)用鋁(lv)箔(bo)紙(zhi)包(bao)裹(guo)試(shi)劑(ji)盒(he)或存放於(yu)暗盒中(zhong)。

　　3.防(fang)止汙染(ran)

　　開(kai)封後(hou)立(li)即(ji)蓋(gai)緊(jin)管蓋(gai)，操作(zuo)時避免說(shuo)話(hua)、咳(ke)嗽(sou)等(deng)產(chan)生(sheng)氣(qi)溶(rong)膠(jiao)汙染(ran)。

　　使用前後(hou)擦(ca)拭操作(zuo)臺和(he)移液器(qi)，建(jian)議在超(chao)凈工(gong)作(zuo)臺內操作(zuo)。

　　二、RNA HS Assay Kit使用前準(zhun)備(bei)：

　　1.試(shi)劑(ji)檢(jian)查

　　離(li)心(xin)確認(ren)：開蓋(gai)前輕(qing)柔(rou)離(li)心(xin)，確保(bao)管(guan)壁(bi)殘留(liu)液體(ti)沈(chen)底。

　　溶(rong)解(jie)沈(chen)澱(dian)：若(ruo)試(shi)劑(ji)因(yin)運(yun)輸出現(xian)結晶，需室(shi)溫(wen)緩(huan)慢(man)溶(rong)解(jie)並(bing)混勻(yun)，避免高(gao)溫或(huo)超(chao)聲(sheng)波破(po)碎(sui)。

　　有效期驗(yan)證：檢查試(shi)劑(ji)瓶(ping)標簽上(shang)的(de)有效期和(he)批(pi)次號(hao)，過(guo)期或性(xing)狀(zhuang)異(yi)常(chang)的(de)試(shi)劑(ji)勿(wu)用。

　　2.實(shi)驗(yan)設(she)計(ji)優化(hua)

　　設(she)置(zhi)對照組(zu)：每(mei)次(ci)實(shi)驗(yan)需包(bao)含(han)無(wu)模板對照（NTC）、陽性(xing)對照（如標準品(pin)）和(he)陰(yin)性(xing)對照（如水(shui)替代(dai)模(mo)板）。

　　預混(hun)Master Mix：提前配(pei)制含(han)熒(ying)光染(ran)料、酶、dNTP等(deng)的(de)主(zhu)混(hun)合(he)液，漩(xuan)渦(wo)振(zhen)蕩混勻(yun)後(hou)短(duan)暫(zan)離(li)心(xin)，減(jian)少(shao)分(fen)裝(zhuang)誤(wu)差。

　　引(yin)物(wu)驗(yan)證：新(xin)引(yin)物(wu)需通過(guo)梯(ti)度(du)稀(xi)釋(shi)測試(shi)擴(kuo)增(zeng)效(xiao)率，避免非(fei)特(te)異(yi)性(xing)擴(kuo)增(zeng)或(huo)引(yin)物(wu)二聚(ju)體(ti)幹(gan)擾。

　　三(san)、RNA HS Assay Kit操作(zuo)技巧(qiao)：

　　1.加(jia)樣規(gui)範(fan)

　　精準(zhun)移液：使用經(jing)校準(zhun)的移液器(qi)，加(jia)樣時(shi)垂(chui)直插(cha)入(ru)液面下，避免氣(qi)泡產(chan)生(sheng)。

　　順序調(tiao)整(zheng)：最後(hou)加(jia)入(ru)模(mo)板RNA或反(fan)轉錄產(chan)物(wu)，減少(shao)交(jiao)叉(cha)汙染(ran)風(feng)險(xian)。

　　預混(hun)震(zhen)蕩：加(jia)樣後(hou)輕(qing)輕拍打管壁(bi)混勻(yun)，或使用低(di)速渦旋儀(yi)。

　　2.避免RNA降解(jie)

　　冰上(shang)操作(zuo)：全程在(zai)冰盒(he)或低(di)溫(wen)金屬板上(shang)操作(zuo)，尤其(qi)是RNA模(mo)板和(he)逆(ni)轉錄步(bu)驟(zhou)。

　　DNase處理：若(ruo)RNA含(han)痕(hen)量DNA，需用無(wu)核(he)酸酶(mei)的(de)DNase I處理，並(bing)徹*去除酶活性(xing)。

　　使用RNA酶(mei)抑(yi)制劑：在反(fan)應體(ti)系中添加(jia)RNase 抑(yi)制劑，尤其(qi)在(zai)樣本(ben)量(liang)低時(shi)。

　　3.儀(yi)器設(she)置(zhi)

　　熒(ying)光閾值調整(zheng)：在指(zhi)數擴增(zeng)期(qi)設(she)定(ding)閾值，避免過(guo)高或(huo)過(guo)低(di)。

　　溫(wen)度(du)校(xiao)準：定(ding)期檢(jian)查PCR儀的溫控(kong)準(zhun)確性(xing)。

　　多(duo)通道(dao)校(xiao)正：若(ruo)使用多(duo)通道(dao)熒(ying)光檢測，需對各通道(dao)進行(xing)交(jiao)叉(cha)補(bu)償校(xiao)準(zhun)。