FISH探(tan)針可(ke)分為(wei)位(wei)點(dian)特(te)異性(xing)探針和(he)著(zhe)絲(si)粒探針(zhen),位(wei)點(dian)特(te)異性(xing)探針又可(ke)分為(wei)計數(shu)探(tan)針和(he)融合/分離(li)探(tan)針。計數(shu)探(tan)針是(shi)通(tong)過(guo)標(biao)記(ji)壹(yi)段(duan)特(te)異性(xing)的DNA片(pian)段(duan),通(tong)過(guo)計數(shu)信號(hao)的數(shu)量(liang)而(er)判斷染(ran)色(se)體或基(ji)因狀(zhuang)態的(de)壹(yi)種(zhong)標記(ji)探(tan)針(zhen)。由於(yu)正(zheng)常(chang)人(ren)的(de)染(ran)色(se)體/基(ji)因是(shi)二(er)倍(bei)體(ti),那麽正(zheng)常(chang)人(ren)的(de)檢(jian)測(ce)信號(hao)就是(shi)兩個,當信號(hao)多(duo)於(yu)兩個或者少(shao)於(yu)兩個,便(bian)可(ke)判斷染(ran)色(se)體或者基(ji)因發(fa)生了異常。
FISH探(tan)針(zhen)基(ji)本(ben)原(yuan)理(li)是(shi)將(jiang)DNA(或RNA)探針用特(te)殊的(de)核(he)苷(gan)酸(suan)分子(zi)標記(ji),然(ran)後(hou)將(jiang)探(tan)針(zhen)直接(jie)雜(za)交(jiao)到(dao)染(ran)色(se)體或DNA纖維(wei)切(qie)片(pian)上(shang),再(zai)用與熒光素(su)分子(zi)偶聯的單克隆(long)抗體與探針分子(zi)特(te)異性(xing)結合來(lai)檢測(ce)DNA序(xu)列(lie)在染(ran)色(se)體或DNA纖維(wei)切(qie)片(pian)上(shang)的(de)定(ding)性、定(ding)位(wei)、相(xiang)對(dui)定(ding)量(liang)分析。
該(gai)技術(shu)具有快(kuai)速、安(an)全(quan)、靈(ling)敏度(du)高以(yi)及探針可(ke)長期保(bao)存(cun)等(deng)特(te)點,目(mu)前已(yi)廣泛(fan)應用於(yu)細胞遺(yi)傳學(xue)、腫(zhong)瘤生物(wu)學(xue)、基(ji)因定(ding)位(wei)、基(ji)因作圖(tu)、基(ji)因擴(kuo)增(zeng)、產(chan)前診(zhen)斷及哺乳動(dong)物(wu)染(ran)色(se)體進(jin)化(hua)研究(jiu)等(deng)領(ling)域(yu)。
FISH探針(zhen)的加(jia)樣:參(can)照選(xuan)用廠商(shang)推薦(jian)或經(jing)過本(ben)實驗室(shi)有(you)效(xiao)性(xing)驗證納入標準(zhun)化(hua)操(cao)作流程文(wen)件(jian)的(de)探(tan)針(zhen)加(jia)樣量(liang),加(jia)到待雜(za)交(jiao)組(zu)織(zhi)中(zhong)央(yang)處(chu),使用合適(shi)的(de)蓋玻片(pian),橡(xiang)膠(jiao)水(shui)泥(ni)密(mi)封四邊。
註(zhu)意事項:
探針的使(shi)用(yong)和(he)配制(zhi)遵(zun)照本(ben)單位(wei)選(xuan)用(yong)試劑(ji)的產(chan)品說明(ming)書(shu)操(cao)作;
蓋(gai)玻片(pian)壹(yi)般(ban)采(cai)用矽化(hua)蓋(gai)玻片(pian)或無菌的蠟膜;
註意環境光強(qiang)度(du),避免(mian)太陽(yang)光或強烈(lie)的光(guang)照;
加(jia)蓋玻片(pian)時註(zhu)意(yi)不(bu)要留(liu)有(you)氣泡,避免因(yin)氣泡造成幹片(pian)現象,導(dao)致(zhi)無雜(za)交(jiao)信號(hao)或雜(za)交(jiao)率(lv)降(jiang)低;
蓋(gai)玻(bo)片(pian)邊(bian)緣封膠不(bu)嚴(yan)密也會(hui)出現幹片(pian)現象。