蛋(dan)白質保(bao)存(cun)方(fang)法妳知多(duo)少

　　蛋(dan)白質的(de)保(bao)存(cun)是(shi)壹個(ge)比(bi)較(jiao)棘(ji)手的(de)問(wen)題，分(fen)子(zi)生(sheng)物學實驗(yan)室(shi)的(de)童鞋們或多或少都(dou)會(hui)碰到(dao)。
 

　　有沒(mei)有遇(yu)到(dao)過，不(bu)同批(pi)次(ci)純化的(de)蛋(dan)白，采(cai)用同樣(yang)的(de)測試(shi)方法(fa)，活(huo)性卻不(bu)太壹樣(yang)？
 

　　有(you)沒(mei)有遇(yu)到(dao)過新(xin)純化的(de)蛋(dan)白，從(cong)冰(bing)箱拿出融化(hua)後(hou)，居(ju)然沈(chen)澱了(le)？
 

　　蛋(dan)白質純(chun)化(hua)後(hou)，保(bao)存(cun)方(fang)式都(dou)有(you)哪(na)些呢(ne)？
 

　　壹、謹(jin)記(ji)蛋(dan)白質的(de)保(bao)存(cun)原(yuan)則
 

　　低(di)溫(wen)、分(fen)裝、濃(nong)縮(suo)、速凍(dong)/速(su)融、添(tian)加劑(ji)
 

　　二、保(bao)存(cun)方(fang)法妳知多(duo)少
 

　　蛋(dan)白質的(de)的(de)保(bao)存(cun)方(fang)法的(de)選擇(ze)取決(jue)於(yu)蛋(dan)白質的(de)穩定(ding)性以(yi)及保(bao)存(cun)後(hou)什麽時(shi)候再次(ci)使用妳的(de)蛋(dan)白。
 

　　1、如(ru)即(ji)提(ti)即(ji)用的(de)話，可(ke)將濃(nong)縮(suo)蛋(dan)白質儲(chu)存(cun)在(zai)單(dan)壹溶(rong)液(如(ru)PBS)，置(zhi)於(yu)聚(ju)丙(bing)烯管或(huo)幹凈(jing)的(de)玻(bo)璃(li)容(rong)器(qi)中，放在(zai)4°C冰(bing)箱保(bao)存(cun)。
 

　　優(you)點(dian)：蛋(dan)白容(rong)易獲(huo)得(de)，可以(yi)快(kuai)速(su)進(jin)行實驗(yan)，且(qie)同壹管(guan)樣(yang)品(pin)可重復(fu)取樣(yang)，這(zhe)樣避免(mian)了因經常解(jie)凍(dong)而加速蛋(dan)白的(de)降(jiang)解。
 

　　缺(que)點(dian)：可(ke)能(neng)會(hui)面(mian)臨微生物汙(wu)染，蛋(dan)白質失(shi)活(huo)和(he)氧化，可(ke)能(neng)對(dui)實驗(yan)數(shu)據的(de)均(jun)壹性造成(cheng)影(ying)響(xiang)。要避免(mian)這種情(qing)況，可以(yi)把(ba)蛋(dan)白質分(fen)成小(xiao)份(fen)儲(chu)存(cun)，並(bing)加入蛋(dan)白酶抑(yi)制劑(ji)、抗(kang)菌劑(ji)和(he)還原(yuan)劑(ji)等。但(dan)也要根(gen)據自己蛋(dan)白的(de)情況，如果(guo)妳的(de)蛋(dan)白是(shi)完(wan)整的(de)膜蛋(dan)白或(huo)分(fen)泌蛋(dan)白,很(hen)可能(neng)分(fen)子(zi)內存(cun)在(zai)二硫鍵，為(wei)保(bao)證其完整性，應該(gai)存(cun)儲(chu)在氧(yang)化環境中。另(ling)外，儲(chu)存(cun)時(shi)間超過壹個(ge)月(yue)的(de)蛋(dan)白可(ke)以(yi)考(kao)慮扔(reng)掉。
 

　　2、透析(xi)到合(he)適的(de)緩(huan)沖(chong)液中可以(yi)凍(dong)幹(gan)，放(fang)4°保(bao)存(cun)；也(ye)可加高濃(nong)度的(de)硫酸(suan)銨(妳的(de)蛋(dan)白不(bu)沈(chen)澱的(de)話)，4°保(bao)存(cun)。
 

　　註意：妳要註意加入硫(liu)酸(suan)銨後(hou)pH會(hui)下降(jiang)壹些(xie)，妳的(de)緩(huan)沖(chong)液可(ke)不(bu)能(neng)太接(jie)近蛋(dan)白的(de)等電(dian)點(dian)啊(a)，蛋(dan)白在(zai)等(deng)電(dian)點(dian)附(fu)近沈澱(dian)很(hen)多時(shi)候是不(bu)可復(fu)溶，即(ji)使(shi)復(fu)溶活(huo)性也不(bu)能(neng)保(bao)證。
 

　　3、純化後(hou)的(de)蛋(dan)白測(ce)濃(nong)度後(hou)，加入50%甘(gan)油，確認(ren)混勻後(hou)分(fen)裝，液氮(dan)速凍(dong)，放(fang)入(ru)-20度或-80度保(bao)存(cun)，尤其適用於(yu)酶類(lei)。
 

　　優(you)點(dian)：在(zai)低(di)溫(wen)下，蛋(dan)白質對(dui)微生物汙(wu)染，蛋(dan)白酶降(jiang)解和(he)氧化反(fan)應更(geng)有(you)抵抗(kang)力(li)，容(rong)易保(bao)證其活(huo)性。用甘油或乙二(er)醇(chun)稀釋使(shi)蛋(dan)白處(chu)於(yu)溶(rong)液中，可以(yi)方(fang)便取樣(yang)。此外，這種方(fang)式(shi)儲(chu)存(cun)的(de)蛋(dan)白質可(ke)以(yi)保(bao)存(cun)長(chang)達壹年，對(dui)於(yu)抗(kang)體(ti)軛合(he)物是(shi)壹個(ge)好(hao)的(de)選擇(ze)。
 

　　缺點(dian)： 蛋(dan)白質在(zai)-20°溶(rong)液中仍(reng)有可能(neng)遭受(shou)水(shui)解(jie)、汙(wu)染和(he)氧化，如(ru)果(guo)蛋(dan)白對(dui)還原(yuan)性環境要求比(bi)較(jiao)高，也(ye)需加入抑(yi)制劑(ji)、還原(yuan)劑(ji)等。而且(qie)將(jiang)樣品(pin)存(cun)放(fang)在50%冷凍(dong)保(bao)護(hu)劑(ji)中有時(shi)是(shi)不可取(qu)的(de)，取決(jue)於(yu)妳接(jie)下來(lai)要(yao)做的(de)實驗(yan)。
 

　　4、有(you)些(xie)蛋(dan)白可(ke)以(yi)不(bu)加甘油，直接(jie)液氮(dan)速凍(dong)幾(ji)分(fen)鐘，-80度保(bao)存(cun)。
 

　　優(you)點(dian)：可(ke)以(yi)長(chang)期保(bao)存(cun)(多(duo)年)，不需(xu)要(yao)甘油、*等化(hua)學(xue)物質，避(bi)免(mian)蛋(dan)白質降(jiang)解或(huo)微生物汙(wu)染。
 

　　缺(que)點(dian)：冷凍(dong)蛋(dan)白質應壹次(ci)性使用，為(wei)了(le)避免(mian)反(fan)復(fu)凍(dong)融發(fa)生(sheng)降(jiang)解。此外,抗(kang)體(ti)軛合(he)物(特(te)別是堿性磷酸(suan)酶復(fu)合物(wu))冷凍(dong)後(hou)可(ke)能(neng)會(hui)失(shi)活(huo)。
 

　　5、長(chang)期保(bao)存(cun)蛋(dan)白質的(de)另(ling)壹個(ge)方(fang)式(shi)是凍(dong)幹(gan)(lyophilization)。
 

　　優(you)點(dian)：蛋(dan)白質凍(dong)幹(gan)後(hou)會(hui)呈現蓬(peng)松的(de)白色粉末形(xing)式，處(chu)於(yu)脫(tuo)水(shui)的(de)狀態，可以(yi)在(zai)冰(bing)箱中無限(xian)期保(bao)存(cun)。
 

　　缺(que)點(dian)：對(dui)於(yu)某(mou)些(xie)蛋(dan)白質，凍(dong)幹(gan)操作有壹個(ge)潛在(zai)問(wen)題就是(shi)蛋(dan)白質不(bu)能(neng)復(fu)溶。凍(dong)幹(gan)/復(fu)溶的(de)過程(cheng)同樣(yang)會(hui)對(dui)蛋(dan)白質產(chan)生壹定(ding)的(de)傷(shang)害(hai)作用。
 

　　三(san)、這些(xie)重點(dian)妳要知(zhi)道
 

　　1、保(bao)證恒定的(de)pH值，壹般PBS最為(wei)常(chang)用；
 

　　2、保(bao)證壹定(ding)的(de)蛋(dan)白濃(nong)度，如果(guo)濃(nong)度比較(jiao)稀的(de)話，可(ke)以(yi)考(kao)慮添(tian)加壹定(ding)量(liang)的(de)BSA；
 

　　3、甘油的(de)添加也能(neng)在很(hen)大程(cheng)度上(shang)提(ti)高(gao)抗(kang)體(ti)的(de)穩定(ding)性；
 

　　4. 為(wei)了(le)防腐(fu)可以(yi)添(tian)加壹定(ding)量(liang)的(de)*(辣根(gen)過氧(yang)化物酶偶聯(lian)的(de)二抗(kang)壹般不能(neng)加)，如果(guo)樣品(pin)要用於(yu)生(sheng)物(wu)學(xue)檢(jian)測，避免(mian)使(shi)用防腐劑(ji)。
 

　　5、無論是(shi)冷凍(dong)還是儲(chu)存(cun)在(zai)溶液中，將蛋(dan)白進(jin)行(xing)分(fen)裝，以(yi)避(bi)免(mian)凍(dong)融，降(jiang)低(di)汙(wu)染的(de)風險。
 

　　6、進(jin)行蛋(dan)白質操作實驗(yan)時(shi)壹定(ding)要(yao)帶(dai)手套，們的(de)皮膚(fu)上(shang)有壹些(xie)蛋(dan)白酶，這(zhe)些(xie)蛋(dan)白酶很(hen)可能(neng)會(hui)降(jiang)解掉我們的(de)蛋(dan)白樣(yang)品(pin)。皮膚(fu)上(shang)的(de)其他(ta)化學(xue)分(fen)子(zi)也(ye)可能(neng)會(hui)汙(wu)染蛋(dan)白樣(yang)品(pin)。另(ling)外，為(wei)了(le)防止細菌的(de)生長(chang)，蛋(dan)白質最(zui)好(hao)保(bao)存(cun)在(zai)滅(mie)菌的(de)小(xiao)管(guan)中。
 

　　7、避免(mian)反(fan)復(fu)凍(dong)融或(huo)凍(dong)幹(gan)重(zhong)溶(rong)解(jie)過程(cheng)，這樣(yang)很(hen)可能(neng)會(hui)降(jiang)低(di)生(sheng)物(wu)活(huo)性。
 

　　8、避免(mian)震蕩(dang)，震蕩(dang)產(chan)生的(de)剪切(qie)力(li)有可能(neng)會(hui)對(dui)蛋(dan)白質產(chan)生破(po)壞(huai)作用。震蕩(dang)時溶(rong)液中會(hui)產(chan)生氣(qi)泡，氧(yang)氣(qi)的(de)進入(ru)會(hui)導致(zhi)蛋(dan)白質處(chu)在氧(yang)化(hua)環境中。蛋(dan)白質中含(han)有半(ban)胱(guang)氨(an)酸(suan)，其極(ji)易被(bei)氧化為(wei)胱(guang)氨(an)酸(suan)，這壹過程(cheng)很(hen)可能(neng)會(hui)破(po)環蛋(dan)白質的(de)活(huo)性。