rRNA作(zuo)為總(zong)RNA中豐富(fu)的(de)成(cheng)員(yuan)，提供(gong)的(de)轉(zhuan)錄(lu)本(ben)信息(xi)卻(que)少(shao)之又(you)少，且(qie)檢測(ce)過多會(hui)掩(yan)蓋其(qi)它基(ji)因(yin)的(de)表(biao)達(da)豐(feng)度(du)，從(cong)而(er)增(zeng)加(jia)低豐度(du)轉(zhuan)錄本(ben)的(de)檢測(ce)難(nan)度(du)。因(yin)此(ci)，通(tong)常在(zai)測(ce)序(xu)之前從(cong)總(zong)RNA樣(yang)品中去除rRNA，rRNA去(qu)除的(de)效率也被視(shi)為z大(da)化讀取到(dao)轉錄(lu)物(wu)的(de)關(guan)鍵(jian)因(yin)素。 rRNA去(qu)除試(shi)劑盒(he)適(shi)用於快(kuai)速(su)提取(qu)植(zhi)物(wu)組(zu)織RNA，使(shi)用(yong)*的(de)裂(lie)解(jie)液迅速(su)裂(lie)解(jie)細胞(bao)和滅(mie)活(huo)細胞(bao)RNA酶，然後(hou)用乙(yi)醇調節結(jie)合條件後(hou)，RNA在(zai)高離(li)序(xu)鹽狀(zhuang)態(tai)下(xia)選(xuan)擇性(xing)吸(xi)附於離(li)心柱(zhu)內矽(gui)基(ji)質膜(mo)，DNase直(zhi)接在(zai)柱(zhu)上(shang)消(xiao)化殘留DNA，再(zai)通(tong)過壹系(xi)列快速(su)的(de)漂(piao)洗－離(li)心的(de)步(bu)驟(zhou), 去(qu)蛋白液和漂(piao)洗液將細胞(bao)代謝(xie)物(wu)，蛋白等(deng)雜(za)質去(qu)除， 最(zui)後(hou)低鹽的(de)RNase free H20將純(chun)凈(jing)RNA從(cong)矽(gui)基(ji)質膜(mo)上(shang)洗脫。
rRNA去(qu)除試(shi)劑盒(he)使用(yong)註意事(shi)項：
1. 所有的(de)離(li)心步(bu)驟均(jun)可在(zai)室(shi)溫(wen)完成,使(shi)用(yong)可容(rong)納五(wu)十ml 離(li)心管(guan)的(de)離(li)心機(ji)。
2. 需要自(zi)備(bei)乙醇,壹次(ci)性註射器(qi)(可(ke)選(xuan)),研(yan)缽(bo)。
3. 裂(lie)解(jie)液RLT 和裂(lie)解(jie)液RLT Plus和去(qu)蛋白液RW1中含有(you)刺(ci)激性(xing)化合物(wu),操作(zuo)時要戴(dai)乳膠手(shou)套,避(bi)免沾(zhan)染(ran)皮膚,眼(yan)睛和衣(yi)服(fu)。若沾染(ran)皮膚、眼(yan)睛時,需要用(yong)大(da)量(liang)清水(shui)或(huo)者(zhe)生(sheng)理鹽(yan)水(shui)沖(chong)洗。
4. 植物(wu)組(zu)織裂(lie)解(jie)是否充分直接影響(xiang)到RNA 提取(qu)的(de)質量(liang)和產量(liang),本試(shi)劑盒(he)中提供(gong)的(de)裂(lie)解(jie)液RLT,主(zhu)要成(cheng)分(fen)為異硫氰(qing)酸(suan)胍,適(shi)用於大(da)多數植物(wu)組(zu)織的(de)裂(lie)解(jie),但(dan)有(you)些植物(wu)組(zu)織(例(li)如(ru)玉(yu)米(mi)的(de)乳(ru)白色(se)胚(pei)乳)或(huo)絲(si)狀(zhuang)真(zhen)菌(jun),由於次(ci)級(ji)代謝(xie)產物(wu)較特(te)殊(shu),異硫氰(qing)酸(suan)胍使(shi)樣(yang)品產生固化,導致(zhi)RNA 無(wu)法(fa)提取(qu),此(ci)時可以向我們索取(qu)另壹種(zhong)裂(lie)解(jie)液RLC,將解決(jue)該問題(ti)。
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