蛋(dan)白定(ding)量(liang)檢(jian)測(ce)試(shi)劑是(shi)用於測(ce)定(ding)不同(tong)樣(yang)本(ben)中(zhong)蛋(dan)白質(zhi)濃度的工具(ju),廣泛(fan)應用於生(sheng)物化學、分(fen)子(zi)生(sheng)物學、臨床診斷(duan)等領域。以(yi)下是(shi)關於蛋(dan)白定(ding)量(liang)檢(jian)測(ce)試(shi)劑的詳(xiang)細說(shuo)明(ming),包(bao)括其類(lei)型、原(yuan)理(li)、應用(yong)場景及註(zhu)意(yi)事(shi)項:
1. 常見(jian)蛋(dan)白定(ding)量(liang)檢(jian)測(ce)方法
考(kao)馬(ma)斯亮藍法(Bradford法(fa)):
原(yuan)理(li):考(kao)馬(ma)斯亮藍染料(liao)與(yu)蛋(dan)白質(zhi)結(jie)合後(hou)發生(sheng)顏(yan)色變(bian)化(hua),在595 nm處有(you)特(te)征吸(xi)收(shou)峰,吸(xi)光(guang)度與(yu)蛋(dan)白質(zhi)濃度成(cheng)正(zheng)比。
特(te)點:操作簡(jian)便(bian)、快速(su),靈(ling)敏(min)度高,但(dan)受(shou)幹擾(rao)物質(zhi)影(ying)響較(jiao)大(da)。
適(shi)用樣本(ben):純(chun)化蛋(dan)白質(zhi)、裂解(jie)物、血(xue)清、血(xue)漿等(deng)。
二喹(kui)啉甲(jia)酸(suan)(BCA)法(fa):
原(yuan)理(li):在堿(jian)性條(tiao)件(jian)下,蛋(dan)白質(zhi)與(yu)Cu2+反應(ying)生(sheng)成(cheng)Cu1+,後(hou)者(zhe)與(yu)BCA試(shi)劑形(xing)成(cheng)紫色絡合物,吸(xi)光(guang)度與(yu)蛋(dan)白質(zhi)濃度成(cheng)正(zheng)比。
特(te)點:抗幹擾(rao)能(neng)力強(對去汙劑、甘油(you)耐(nai)受(shou)性較(jiao)好(hao)),靈(ling)敏(min)度稍低(di)於Bradford法(fa),但(dan)更穩(wen)定(ding)。
適(shi)用(yong)樣本(ben):復(fu)雜(za)蛋(dan)白質(zhi)混(hun)合物、細胞(bao)裂解(jie)液(ye)、血(xue)清/血(xue)漿等(deng)。
紫外吸(xi)收(shou)法(fa)(Lowry法(fa)):
原理(li):蛋(dan)白質(zhi)中(zhong)的酪氨(an)酸(suan)和色氨酸(suan)在280 nm處有(you)特(te)征吸(xi)收(shou)峰,通過(guo)吸(xi)光(guang)度計算(suan)蛋(dan)白質(zhi)濃度。
特(te)點:無(wu)需試(shi)劑,但(dan)受(shou)核(he)酸(suan)、多(duo)肽等(deng)幹擾(rao),靈(ling)敏(min)度較低(di)。
適(shi)用樣(yang)本(ben):純(chun)化蛋(dan)白質(zhi)、無(wu)核酸(suan)汙(wu)染(ran)的樣(yang)品(pin)。
比(bi)濁法(如Peterson法):
原(yuan)理(li):蛋(dan)白質(zhi)在酸(suan)性條(tiao)件(jian)下與(yu)酚類(lei)物質(zhi)反應(ying)生(sheng)成(cheng)有(you)色復(fu)合物,吸(xi)光(guang)度與(yu)濃度相(xiang)關。
特(te)點:靈(ling)敏(min)度高,但(dan)操(cao)作(zuo)復(fu)雜(za),易(yi)受(shou)幹擾(rao)。
熒(ying)光(guang)法(fa)(如熒光染料標(biao)記(ji)法(fa)):
原理(li):熒光(guang)染(ran)料(liao)(如FITC、熒光(guang)素)與(yu)蛋(dan)白質(zhi)結(jie)合後(hou)發出熒光,熒(ying)光(guang)強度與(yu)蛋(dan)白質(zhi)濃度相(xiang)關。
特(te)點:靈(ling)敏(min)度高,適合低(di)濃度蛋(dan)白檢(jian)測(ce),但(dan)需要熒光(guang)檢(jian)測(ce)儀(yi)。
2. 蛋(dan)白定(ding)量(liang)檢(jian)測(ce)試(shi)劑應用(yong)場景:
純(chun)化蛋(dan)白質(zhi)定(ding)量(liang):
用(yong)於評估蛋(dan)白質(zhi)純(chun)化過(guo)程中(zhong)的產量(liang)和純(chun)度。
推薦方法:Bradford法(fa)或(huo)BCA法(fa)。
細胞(bao)裂解(jie)物定(ding)量(liang):
測(ce)定(ding)細胞(bao)裂解(jie)液(ye)中(zhong)的總(zong)蛋(dan)白質(zhi)濃度,用(yong)於後(hou)續電泳(yong)、免(mian)疫印(yin)跡等實(shi)驗。
推(tui)薦方法:BCA法(fa)(抗去(qu)汙劑幹擾(rao))。
血(xue)清/血(xue)漿定(ding)量(liang):
測(ce)定(ding)血(xue)液中(zhong)的蛋(dan)白質(zhi)濃度,用(yong)於臨(lin)床診斷(duan)或(huo)研(yan)究。
推薦方法:BCA法(fa)或(huo)紫外吸(xi)收(shou)法(fa)。
復(fu)雜(za)蛋(dan)白質(zhi)混(hun)合物定(ding)量(liang):
如(ru)組織勻漿、體液(ye)等復(fu)雜(za)樣本(ben)中(zhong)的蛋(dan)白質(zhi)定(ding)量(liang)。
推(tui)薦方法:BCA法(fa)(抗幹擾(rao)能(neng)力強)。
稀釋系(xi)列標(biao)準曲(qu)線:
通過(guo)已(yi)知(zhi)濃度的標(biao)準蛋(dan)白質(zhi)(如(ru)BSA)制備(bei)標(biao)準曲(qu)線,計算(suan)未(wei)知樣(yang)本(ben)的蛋(dan)白質(zhi)濃度。
