壹(yi)、核(he)酸(suan)定量檢(jian)測(ce)試劑(ji)的(de)原(yuan)理(li)
核(he)酸(suan)定量檢(jian)測(ce)試劑(ji)的(de)工作原(yuan)理(li)主(zhu)要基(ji)於(yu)幾(ji)種不(bu)同(tong)的(de)技術(shu),包(bao)括分(fen)光(guang)光度法、熒(ying)光染料法和(he)實(shi)時熒(ying)光定量PCR法等(deng)。
分光(guang)光度法:
原(yuan)理(li):通(tong)過(guo)測(ce)定核(he)酸(suan)在特(te)定波長下(xia)的(de)光吸(xi)收(shou)值(zhi)來(lai)推算(suan)其(qi)濃度。DNA和(he)RNA在250~270nm波(bo)長範圍(wei)內有(you)最(zui)大(da)吸(xi)收(shou)值(zhi),其(qi)中260nm波長最(zui)為常用(yong)。根(gen)據吸(xi)光(guang)值(zhi)與(yu)核(he)酸(suan)濃度的(de)正(zheng)比(bi)關系(xi),可(ke)以計算(suan)出樣(yang)品中核(he)酸(suan)的(de)含量(liang)。
特(te)點:操作簡(jian)便(bian)、迅(xun)速(su),但易(yi)受(shou)蛋(dan)白(bai)質(zhi)和(he)核(he)苷酸(suan)等(deng)雜質的(de)影響(xiang),且(qie)無(wu)法區(qu)分(fen)DNA、RNA、降(jiang)解核(he)酸(suan)及遊(you)離(li)核(he)苷酸(suan)等(deng)。
熒(ying)光染料法:
原(yuan)理(li):利(li)用(yong)專門配(pei)套的(de)熒(ying)光檢測(ce)技(ji)術(shu),只有(you)與(yu)DNA、RNA或蛋(dan)白(bai)質(zhi)結合後才發出熒(ying)光的(de)染料。這(zhe)些(xie)熒(ying)光染料只有(you)與(yu)特(te)異(yi)性(xing)的(de)靶分(fen)子結合時才能發出熒(ying)光信號,采(cai)用(yong)熒(ying)光染料檢(jian)測(ce)特(te)定目標(biao)分(fen)子(zi)的(de)濃度,可(ke)以對DNA和RNA進行精(jing)準定量。
特(te)點:靈敏(min)度和(he)特(te)異(yi)性(xing)均(jun)較高(gao),可(ke)檢測(ce)到(dao)pg級(ji)別(bie)的(de)核(he)酸(suan),但需(xu)要專用(yong)的(de)耗(hao)材(cai)和試劑(ji),價格(ge)相對昂貴(gui)。
實(shi)時熒(ying)光定量PCR法(qPCR):
原(yuan)理(li):在(zai)PCR反(fan)應(ying)體系(xi)中加入熒(ying)光染料或(huo)熒(ying)光探針(zhen),使核(he)酸(suan)擴增(zeng)過(guo)程(cheng)呈(cheng)現出實(shi)時的(de)熒(ying)光信號變(bian)化(hua)。擴(kuo)增(zeng)指數期對應(ying)的(de)Ct值(zhi)與(yu)起始模板濃(nong)度的(de)對數存在(zai)線(xian)性(xing)反比關系(xi),結合已(yi)知(zhi)濃(nong)度標(biao)準(zhun)品建立的(de)標(biao)準(zhun)曲線(xian),可(ke)對核(he)酸(suan)進行定量。
特(te)點:特(te)異(yi)性(xing)和靈敏(min)度均(jun)非(fei)常高(gao),引(yin)物(wu)和探針(zhen)的(de)特(te)異(yi)性(xing)確(que)保(bao)只對靶核(he)酸(suan)準確(que)定量,不(bu)受(shou)非(fei)目標(biao)核(he)酸(suan)和其(qi)他(ta)遊(you)離(li)核(he)苷酸(suan)的(de)影響(xiang)。但(dan)需要特(te)定試劑(ji)和(he)儀(yi)器(qi),操(cao)作(zuo)過(guo)程(cheng)繁(fan)瑣、檢測(ce)時間較(jiao)長。
二(er)、核(he)酸(suan)定量檢(jian)測(ce)試劑(ji)的(de)應(ying)用(yong)
核(he)酸(suan)定量檢(jian)測(ce)試劑(ji)在(zai)多個領(ling)域(yu)具(ju)有(you)廣泛(fan)的(de)應(ying)用(yong)價值(zhi),主(zhu)要包(bao)括以(yi)下(xia)幾個(ge)方(fang)面:
疾病(bing)診斷(duan):
通(tong)過(guo)檢(jian)測(ce)患(huan)者(zhe)樣(yang)本(ben)中的(de)DNA或RNA含(han)量,輔助醫生(sheng)進行疾病(bing)的(de)診斷(duan)。例(li)如,在新冠病(bing)毒檢測(ce)中,核(he)酸(suan)定量檢(jian)測(ce)試劑(ji)可(ke)以精(jing)確(que)測(ce)量(liang)病(bing)毒RNA的(de)數量(liang),幫助醫生(sheng)判(pan)斷(duan)患(huan)者(zhe)的(de)感染(ran)情況(kuang)和病(bing)情(qing)嚴重(zhong)程(cheng)度。
基(ji)因(yin)研究(jiu):
在(zai)基(ji)因(yin)克隆(long)、基(ji)因(yin)表(biao)達(da)分(fen)析(xi)、基因(yin)突變(bian)檢(jian)測(ce)等(deng)研究(jiu)中,核(he)酸(suan)定量檢(jian)測(ce)試劑(ji)可(ke)以提供(gong)準確(que)、可(ke)靠(kao)的(de)核(he)酸(suan)濃度數(shu)據,為研究(jiu)人(ren)員提供(gong)有(you)力(li)的(de)支持。
藥(yao)物研發:
藥(yao)物研發過(guo)程(cheng)中需要對藥(yao)物作(zuo)用(yong)靶(ba)點進行定量檢(jian)測(ce),核(he)酸(suan)定量檢(jian)測(ce)試劑(ji)可(ke)以提供(gong)精(jing)確(que)的(de)核(he)酸(suan)濃度信息(xi),有(you)助(zhu)於評估藥(yao)物的(de)療效(xiao)和安全性(xing)。
環境監(jian)測(ce):
核(he)酸(suan)定量檢(jian)測(ce)試劑(ji)還可(ke)以用(yong)於(yu)環境微(wei)生物(wu)的(de)檢測(ce)和(he)監(jian)測(ce),如(ru)水體中的(de)細菌(jun)、病(bing)毒等(deng)汙染物(wu)的(de)含量(liang)測(ce)定。
三(san)、核(he)酸(suan)定量檢(jian)測(ce)試劑(ji)的(de)前景
隨著(zhe)生物(wu)技(ji)術(shu)的(de)不(bu)斷(duan)發展(zhan)和(he)進步,核(he)酸(suan)定量檢(jian)測(ce)試劑(ji)的(de)前景十分廣闊(kuo)。
技(ji)術進步:
隨著(zhe)基因(yin)測(ce)序(xu)、基(ji)因(yin)編輯等(deng)技術(shu)的(de)不(bu)斷(duan)發展(zhan),對核(he)酸(suan)定量檢(jian)測(ce)的(de)需求(qiu)將(jiang)不(bu)斷(duan)增加。同(tong)時,新的(de)熒(ying)光染料、探(tan)針(zhen)等(deng)技術(shu)的(de)出現也(ye)將(jiang)進壹(yi)步(bu)提高(gao)核(he)酸(suan)定量檢(jian)測(ce)的(de)準確(que)性(xing)和靈敏(min)度。
市場需(xu)求(qiu):
隨著(zhe)人(ren)們對健(jian)康(kang)和環境的(de)關註度不(bu)斷(duan)提高(gao),對疾病(bing)診斷(duan)、環境監(jian)測(ce)等(deng)方(fang)面的(de)需求(qiu)也(ye)將(jiang)不(bu)斷(duan)增加。這(zhe)將(jiang)推動核(he)酸(suan)定量檢(jian)測(ce)試劑(ji)市場的(de)不(bu)斷(duan)擴大(da)和(he)發展(zhan)。
政(zheng)策推動(dong):
各國政(zheng)府對生物(wu)技術(shu)產(chan)業的(de)支持力(li)度不(bu)斷(duan)加大(da),出臺(tai)了(le)壹(yi)系(xi)列(lie)優惠(hui)政策和資(zi)金支(zhi)持措(cuo)施(shi)。這(zhe)將(jiang)為核(he)酸(suan)定量檢(jian)測(ce)試劑(ji)的(de)研發和生產提(ti)供(gong)有(you)力(li)的(de)保(bao)障(zhang)和(he)支(zhi)持。
綜(zong)上(shang)所述,核(he)酸(suan)定量檢(jian)測(ce)試劑(ji)在(zai)原(yuan)理(li)、應(ying)用(yong)和(he)前景等(deng)方(fang)面都(dou)具有(you)的(de)優勢(shi)和廣闊(kuo)的(de)市場前(qian)景。隨著(zhe)技術(shu)的(de)不(bu)斷(duan)進步和市場的(de)不(bu)斷(duan)擴大(da),相(xiang)信核(he)酸(suan)定量檢(jian)測(ce)試劑(ji)將(jiang)在更(geng)多領(ling)域(yu)發揮(hui)重(zhong)要作(zuo)用(yong)。