1、合適的細胞(bao)培養(yang)基(ji)
合適的細胞(bao)培養(yang)基(ji)是體(ti)外(wai)細胞(bao)生長增殖的重要的條件之(zhi)壹(yi),培養(yang)基(ji)不僅(jin)提(ti)供細胞(bao)營養和(he)促使細(xi)胞(bao)生長增殖的基礎(chu)物質,而(er)且還(hai)提(ti)供培養(yang)細(xi)胞(bao)生長和繁殖(zhi)的生存(cun)環(huan)境(jing)。
2、血清(qing)
目(mu)前,大(da)多數(shu)合成培養(yang)基(ji)都需(xu)要添(tian)加(jia)血清(qing)。血(xue)清(qing)是(shi)細(xi)胞(bao)培養(yang)液中(zhong)重(zhong)要的成分之(zhi)壹(yi),含有細胞(bao)生長所需(xu)的多種(zhong)生長因子(zi)及(ji)其它營養成分。
3、無(wu)菌(jun)無(wu)毒細(xi)胞(bao)培養(yang)環(huan)境(jing)
無(wu)菌(jun)無(wu)毒的操作環(huan)境(jing)和培養(yang)環(huan)境(jing)是保(bao)證(zheng)細胞(bao)在體(ti)外(wai)培養(yang)成功的首(shou)要(yao)條件。
在(zai)體(ti)外(wai)培養(yang)的細胞(bao)由(you)於缺乏(fa)對微生(sheng)物和有毒物的防禦能力,壹(yi)旦(dan)被(bei)微生(sheng)物或有毒物質汙染,或者自身(shen)代謝物質積(ji)累,可導致(zhi)細(xi)胞(bao)中(zhong)毒(du)死亡。因此(ci),在體(ti)外(wai)培養(yang)細(xi)胞(bao)時(shi),必(bi)須保持(chi)細(xi)胞(bao)生存(cun)環(huan)境(jing)無(wu)菌(jun)無(wu)毒,及(ji)時(shi)清(qing)除(chu)細(xi)胞(bao)代謝產物。
4、恒(heng)定(ding)的細胞(bao)生長溫(wen)度
維持培養(yang)細(xi)胞(bao)旺盛(sheng)生長,必(bi)須有恒(heng)定(ding)而(er)適宜的溫(wen)度。不同(tong)種(zhong)類(lei)的細胞(bao)對培養(yang)溫(wen)度要求(qiu)也(ye)不(bu)同(tong),人(ren)體(ti)細(xi)胞(bao)培養(yang)的標準溫(wen)度為36。5℃±0。5℃,偏離這壹溫(wen)度範圍(wei),細(xi)胞(bao)的正常代謝會受(shou)到影響,甚至(zhi)死亡。
培養(yang)細(xi)胞(bao)對低溫(wen)的耐(nai)受力(li)較對高溫(wen)強,溫(wen)度上升(sheng)不(bu)超(chao)過39℃時(shi),細胞(bao)代謝與溫(wen)度成正比;人(ren)體(ti)細(xi)胞(bao)在39-40℃1小(xiao)時(shi),即能(neng)受(shou)到壹定(ding)損傷,但仍有可能恢(hui)復(fu);在(zai)40-41℃1小時(shi),細胞(bao)會普(pu)遍(bian)受到損傷(shang),僅(jin)小(xiao)半數(shu)有可能恢(hui)復(fu);41-42℃1小(xiao)時(shi),細胞(bao)受到嚴重(zhong)損(sun)傷,大(da)部分(fen)細(xi)胞(bao)死亡,個(ge)別細(xi)胞(bao)仍有恢復(fu)可能;當(dang)溫(wen)度在43℃以上(shang)1小(xiao)時(shi),細胞(bao)全(quan)部死(si)亡。
相(xiang)反,溫(wen)度不低(di)於0℃時(shi),對細胞(bao)代謝雖有影響,但並無(wu)傷害(hai)作用;把細(xi)胞(bao)放入(ru)25-35℃時(shi),細胞(bao)仍能(neng)生存(cun)和(he)生長,但速(su)度減(jian)慢;放在(zai)4℃數(shu)小(xiao)時(shi)後,再(zai)回到37℃培養(yang),細(xi)胞(bao)仍能(neng)繼(ji)續(xu)生(sheng)長。細胞(bao)代謝隨(sui)溫(wen)度降(jiang)低而(er)減(jian)慢。當溫(wen)度降(jiang)至(zhi)冰點以下(xia)時(shi),細胞(bao)可因胞(bao)質結冰(bing)受損(sun)而(er)死亡。
但是,如(ru)果(guo)向培養(yang)液中(zhong)加(jia)入(ru)壹定(ding)量的冷(leng)凍(dong)保(bao)護劑(二(er)甲(jia)亞(ya)碸(feng)或甘(gan)油(you)),可在深(shen)低(di)溫(wen)下如(ru)-80℃或-196℃(液氮)長期(qi)保存(cun)。
5、合適的氣(qi)體(ti)環(huan)境(jing)
氣(qi)體(ti)是(shi)哺乳動物細胞(bao)培養(yang)生(sheng)存(cun)必(bi)需(xu)條件(jian)之(zhi)壹(yi),所需(xu)氣(qi)體(ti)主(zhu)要有氧氣(qi)和(he)二(er)氧化(hua)碳(tan)。