1.保證所有實(shi)驗室(shi)材料(liao)都無(wu)菌(jun)
穿(chuan)插汙(wu)染是(shi)細(xi)胞(bao)培育的(de)大敵(di)。即使是(shi)輕(qing)微(wei)的(de)汙(wu)染,也(ye)或(huo)許(xu)毀了(le)幾個星(xing)期(qi)的(de)效果(guo),因(yin)培育箱內溫暖濕(shi)潤(run),真菌(jun)極(ji)易成(cheng)長(chang),因(yin)而有(you)必要註(zhu)意(yi)定(ding)時清(qing)潔。
此(ci)外(wai),在將培育瓶、移(yi)液(ye)管及(ji)其他的(de)相(xiang)關(guan)物(wu)品(pin)放(fang)入(ru)超(chao)凈臺之(zhi)前(qian),運用酒精擦(ca)拭幹(gan)凈,以(yi)防止汙(wu)染。
2.選(xuan)擇上(shang)佳(jia)的(de)培育基(ji)開(kai)發策(ce)略
在(zai)細(xi)胞(bao)培育進程(cheng)中(zhong),培育基(ji)是(shi)操控產(chan)品(pin)質量、產(chan)量和(he)本錢的(de)重要要素(su)。有(you)必要針對每(mei)種(zhong)培育物(wu)來(lai)定(ding)制(zhi)培育基(ji),以(yi)優(you)化(hua)實(shi)驗成果(guo),在決(jue)定(ding)以(yi)哪種(zhong)方法(fa)來(lai)開(kai)發您(nin)的(de)培育基(ji)時(shi),您(nin)需(xu)要考(kao)慮時(shi)間和(he)本(ben)錢(qian)等(deng)要素(su)。
3.在(zai)傳代(dai)之(zhi)前(qian)不(bu)要讓(rang)細(xi)胞(bao)集(ji)合(he)
集(ji)合(he)度(du)是(shi)指貼壁細胞(bao)占(zhan)有(you)培育瓶表面(mian)積的(de)份額(e)。集(ji)合意(yi)味著100%的(de)表面(mian)都被貼壁細胞(bao)覆(fu)蓋(gai),壹定(ding)要防止這種(zhong)狀況,由於(yu)它意(yi)味著細胞(bao)不(bu)能繼續(xu)成(cheng)長(chang)。不(bu)過,燃眉之(zhi)急是(shi)運用活(huo)潑(po)成長(chang)的(de)細胞(bao)。
4.運用對(dui)數(shu)成長(chang)期(qi)的(de)細胞(bao)
細(xi)胞(bao)培育進程(cheng)共(gong)有3個(ge)階(jie)段(duan):停滯期(qi)、對數(shu)期(qi)和平臺(tai)期(qi),分別(bie)代(dai)表了(le)低(di)細胞(bao)成(cheng)長(chang)、高細(xi)胞(bao)成(cheng)長(chang)和(he)無(wu)細(xi)胞(bao)成(cheng)長(chang),有(you)生機的(de)細胞(bao)是(shi)健(jian)康(kang)的(de),快速分(fen)裂(lie)的(de),在對(dui)數(shu)期(qi)以(yi)70-80%的(de)集合(he)度(du)存在。
5.在(zai)運用前(qian)正(zheng)確(que)解凍(dong)細胞(bao)
盡(jin)管解凍(dong)看起來(lai)是(shi)個(ge)簡(jian)略的(de)步(bu)驟(zhou),但(dan)有(you)必(bi)要操作(zuo)得當,防止損傷(shang)細胞(bao)。長(chang)期(qi)暴露(lu)在高溫條件下(xia)會使細(xi)胞(bao)無(wu)法(fa)鋪(pu)板,因(yin)而,凍(dong)存管應(ying)當(dang)在(zai)37°C水浴(yu)中放(fang)置(zhi)2分鐘(zhong),然後(hou)用條件培育基(ji)稀釋(shi),以(yi)防止DMSO造成(cheng)直接損傷(shang)。
6.小心(xin)處(chu)理您的(de)培育物(wu)
細(xi)胞(bao)培育的(de)脆弱(ruo)性怎樣強(qiang)調(tiao)也(ye)不為過。劇烈搖晃(huang),或(huo)接連(lian)的(de)溫度(du)波(bo)動(dong)或(huo)許(xu)會對(dui)成長(chang)發(fa)生不利的(de)影響。保證培育箱是(shi)水平的(de),溫度(du)均(jun)壹,且(qie)遠(yuan)離(li)電(dian)動(dong)儀(yi)器(qi)。
此(ci)外(wai),盡量防止壹次處(chu)理多(duo)個細胞(bao)系(xi),由(you)於(yu)它或(huo)許(xu)會影響細(xi)胞(bao)的(de)基(ji)因(yin)型和(he)表型。