細(xi)胞從(cong)培養皿(min)上(shang)的解(jie)離

　　以下通用步驟可以在保持細胞完(wan)整性(xing)的(de)同時(shi)從(cong)培養器皿中分離多種(zhong)細胞系。但這(zhe)壹步(bu)驟不(bu)能廣(guang)泛(fan)適用(yong)於所有細(xi)胞系。應通(tong)過(guo)實(shi)驗(yan)來(lai)確(que)定不(bu)同(tong)體(ti)系所需(xu)的佳(jia)條件和濃度。
 

　　・在傳(chuan)代培(pei)養時(shi)監(jian)測細(xi)胞存活(huo)率。
 

　　・細(xi)胞存活(huo)率應大(da)於90%。
 

　　・對於無血清(qing)培養基，建議(yi)降低(di)胰酶(mei)用(yong)量。
 

　　1.去(qu)除器皿中原有細胞培養基。
 

　　2.用(yong)不(bu)含(han)鈣鎂(mei)的(de)平衡鹽(yan)溶(rong)液或EDTA清洗細胞。將清洗溶液加到(dao)培(pei)養瓶中與(yu)細(xi)胞相對的壹側(ce)。搖動(dong)培養瓶1-2分鐘以沖洗細胞層(ceng)，然(ran)後(hou)倒掉清洗溶液。
 

　　3.在培養瓶中與(yu)細(xi)胞相對的壹側(ce)以2-3ml/25cm2的比(bi)例(li)加(jia)入選(xuan)定的解(jie)離溶(rong)液(見下表)。確保解(jie)離溶(rong)液能夠(gou)覆(fu)蓋整個細(xi)胞層(ceng)。在(zai)37℃下(xia)孵育(yu)培養瓶。並輕(qing)輕搖動。通(tong)常(chang)細胞在5-15分鐘內(nei)解(jie)離。不(bu)同(tong)細(xi)胞系的解(jie)離時(shi)間有(you)所不(bu)同(tong)。仔細(xi)觀(guan)測解(jie)離過(guo)程(cheng)，以免(mian)損傷細(xi)胞。對於難(nan)從(cong)基質上解(jie)離下(xia)來的(de)細胞系，可以輕敲培養瓶以加快(kuai)解(jie)離過(guo)程(cheng)。
 

　　4.當細胞解(jie)離時(shi)，豎(shu)直放(fang)置(zhi)培(pei)養瓶使細(xi)胞流向培(pei)養瓶底部。向培(pei)養瓶中加入培養基。反(fan)復吹(chui)吸(xi)單(dan)層(ceng)表(biao)面(mian)以分散細胞。計(ji)算(suan)細胞個數(shu)，然後(hou)傳(chuan)代(dai)培(pei)養細(xi)胞。
 

　　註意：如(ru)果使用(yong)無(wu)血(xue)清(qing)培養基，應加(jia)入(ru)大豆胰酶(mei)抑制(zhi)劑。對於0.25mg/ml的胰酶(mei)抑制(zhi)劑，壹般按(an)1：1(體(ti)積(ji)比(bi))的比(bi)例(li)加(jia)入即可抑制(zhi)胰酶(mei)。細(xi)胞